大鼠肺泡上皮细胞L2培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡上皮细胞L2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次建议1:2比例进行传代；每2天更换培养基。

备注：用无菌离心管收集培养基，以便进行对比实验。如果对比实验效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞接收与处理

收到细胞后，待其生长至良好状态时，应将其灌满完全培养基并封闭瓶口，以保障细胞运输的稳定性。收到细胞后请用75%酒精喷洒整个细胞瓶，待消毒后放入超净台内进行无菌操作。随后，将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。请通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同放大倍数的照片（建议各拍一张40x、100x、200x），前三天的照片将作为售后依据，未提供照片则默认为状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2培养箱中。如细胞密度超过80%，则可以进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察。待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使其脱落，随后将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后续要将细胞转入液氮罐中，需先在-80℃冰箱中存放24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。可按下列方法处理：收集培养瓶内所有培养液至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行对比培养，随后用胰酶1-2ml轻轻消化，结束后用培养基终止反应，离心并重悬。之后按1:2比例进行分瓶传代，并补充完全培养基。

五、售后条款

对于细胞出现问题的情况，我们提供以下重发政策：

1. 如在运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损或培养液严重泄漏，情形符合条件者，重发。
2. 如在收到产品48小时内检测到细胞污染并提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 若常温发货的细胞在静置24小时后，冻存细胞复苏后24小时无存活，需提供细胞状态照片，可重发。
4. 如细胞活性有问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，经确认后重发。

请注意，客户因操作不当、培养条件不佳或未提供前三天照片，导致细胞状态不良者，不予重发。我们致力于为您提供优质的产品和服务，感谢您选择尊龙凯时。