在生物医学领域，样本的采集和保存对于ELISA（酶联免疫吸附测定）的应用至关重要。可以作为ELISA测定样本的种类繁多，包括体液（如血清）、分泌物（如唾液）和排泄物（如尿液、粪便）等，这些样本可用于测定特定的抗体或抗原成分。有些样本可直接进行检测，例如血清和尿液，而另一些样本则需要预处理，如粪便和特定分泌物。

通常情况下，ELISA检测以血清作为主要样本。相对而言，血浆仍然包含纤维蛋白原和抗凝剂，而血清则在自然凝固后即可获得，操作更为简便。在医学检验中，血清作为检测样本的使用频率最高。尽管血浆和血清在ELISA中都可以应用，但在采用血清样本时，需要特别注意防止溶血，因为溶血会导致非特异性显色，影响检测的准确性。

检测时，血清样本应在新鲜时使用，避免细菌污染，以防产生假阳性反应。储存时，一般在5天内，应保持在4℃，超过一周则需低温冷冻。解冻后的血清应充分混匀，避免强烈摇动，防止气泡和局部浓缩。如果样本浑浊或有沉淀，需进行离心或过滤，以确保准确检测。反复冻融会降低抗体效价，因此，如需多次检测，建议分装保存。

在准备试剂方面，务必遵循试剂盒说明书的要求，使用新鲜的高质量蒸馏水或去离子水来配制所需试剂。自制缓冲液时需使用pH计严格控制pH值。取出的试剂应在室温下使用，并将未用部分及时放回冰箱以保持其活性。

加样过程在ELISA中通常包括三个步骤：加样本、加酶结合物和加底物。在加样时，样本必须沿LEISA板孔底部添加，避免产生气泡及溅出。为防止交叉污染，每次加样应更换吸嘴，必要时可以使用定量塑料管进行加样。在需稀释的样本中，可以先按照规定稀释后再加样，也可以在孔中加入稀释液后再添加样本，并轻轻摇匀。

温育是在ELISA中重要的一步，通常有两次抗原抗体反应。反应的完成需要适宜的温度和时间，通常用37℃进行1-2小时的温育，这样可以达到最佳产物生成峰值。虽然43℃可加速反应，但不宜超过该温度。尽管在4℃下的抗原抗体反应更加彻底，但在ELISA中一般不采用，因所需时间过长。

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